中国成年病人手术后的膀胱癌组织。

5×105cells/T25培养瓶

贴壁

HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌检测阴性。

（1）移行细胞癌 （2）鳞状细胞癌 （3）腺癌 （4）有些为混合性。其中以移行细胞癌为最常见，腺癌很少见。

TNM 分期Tａ 非浸润性乳头状癌Tiｓ 原位癌T1 肿瘤侵及上皮下结缔组织T2 肿瘤侵及浅 肌层；T3 肿瘤侵及深肌层或膀胱周围脂肪:T3a 侵及深肌层；T3b 侵及膀胱周围脂肪；T4 侵 及邻近组织:T4a 侵犯前列腺，子宫；T4b 侵犯盆壁，腹壁阴道N1 单一，≤2cm 淋巴结转 移N2 >2～5cm，或都是≤5cm 多发淋巴结转移N3 有>5cm 淋巴结转移Mo 无远处转移M1 有远处转移Oa 期Ta No Mo()i。期Tis No MoI 期Tl No MoⅡ期T2 No MoT3a No MoⅢ期 T3a-b No MoⅣ期T4b No Mo 任何T N1-3 Mo 任何T 任何N MlJewett-Marshall 分期O 期原 位癌O 期非浸润乳头状瘤A 期粘膜下浸润Bl 期侵犯浅肌层B2 期．侵犯深肌层C 期侵 犯膀胱周围脂肪D1 期局部淋巴结转移D2 期邻近局部淋巴结转移远处转移 www.

如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。