中国成年病人手术后的肺癌组织

5×105cells/T25培养瓶

贴壁

HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌检测阴性。

1、中央型：肿瘤发生在段以上的支气管，即发生在叶支气管及段支气管。 2、周围型：肿瘤发生在段以下支气管。 3、弥温型：肿瘤发生在细支气管或肺泡，弥漫分布于两肺。

按世界卫生组织（WHO，1981）提出的标准分型如下： 1、鳞状细胞癌：简称鳞癌，包括梭形细胞（鳞）癌； 2、腺癌：包括管状腺癌、乳头状腺癌、细支气管癌、肺泡细胞癌； 3、腺鳞癌； 4、未分化癌：分为小细胞癌（包括燕麦细胞型、中间细胞型、复合燕麦细胞型）和大细胞 癌（包括巨细胞、透明细胞癌）； 5、类癌（肺内分泌肿瘤）； 6、支气管腺癌（包括腺样囊性癌、粘液表皮样癌、腺泡细胞癌）；

0 期：原位癌 Ia：T1NoMo Ib：T2NoMo IIa：T1N1Mo IIb：T2N1Mo T3NoMo IIIa：T3N1Mo T1N2Mo T2N2Mo T3N2Mo IIIb：T4NoMo T4N1Mo T4N2Mo T1N3Mo T2N3Mo T3N3Mo T1N2Mo IV：任何T、任何N、M1

如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。