中国成年病人手术后的直肠癌组织

5×105cells/T25培养瓶

贴壁

HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌检测阴性。

1、直肠癌肿块型：又称菜花型癌。癌肿向肠腔内突出，浸润肠壁少，癌肿增大时表面可产 生溃疡，预后较差。 2、直肠癌溃疡型：多见，占50%，向肠壁深层生长，并向四周浸润，易出血，分化程度低， 较早转移。 3、直肠癌狭窄型：少见，又称浸润性。癌肿沿肠壁蔓延浸润，易引起肠壁狭窄，转移早且 预后差。

1、管状腺癌：癌组织细胞呈管状样结构。 根据分化程度，可分化为三级： （1）高分化腺 （2）中分化腺癌 （3）低分化腺癌 2、粘液腺癌：癌细胞中出现大量粘液。粘液成分占全部癌组织细胞60％以上，才能诊断为 粘液腺癌。60%一下则不属于粘液腺癌，以粘液的多少来作为诊断标准，粘液腺癌大约占直 肠腺癌的20%左右。 3、乳状腺癌：癌组织细胞呈粗细大小不等的乳头状结构，乳头中央为中心索。 乳状腺癌根据生长方式可分两种： （1）腺癌组织细胞向粘膜表面生长呈绒毛状腺瘤。 （2）肿瘤向深部腺腔内蔓延侵润呈囊状结构呈乳头状增生。 4、未分化癌：癌细胞比较小，呈团块状，形状与排列不整齐，容易侵入细小血管及淋巴管 道中，侵润比较明显，分化程度比较低。

如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。本公司按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。