人牙龈成纤维细胞永生化

牙齿组织

成纤维细胞

HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌检测阴性。

人牙龈成纤维细胞永生化专用培养基 气相：95%空气+5%二氧化碳；温度：37℃

贴壁生长

无血清冻存液，液氮储存

首次传代建议1：2传代 1:2传代就是1个T25瓶传2个T25瓶或者2个6cm皿。不是1个T25瓶传2个10cm皿

人牙龈成纤维分离自牙齿组织；牙龈表面为复层鳞状上皮，有角化层或不全角化层。上皮钉较长，伸入结缔组织。牙龈上皮不仅覆盖牙龈外露部分，而且也转向内侧，覆盖龈沟壁称为沟内上皮；一部分附着在牙体上称为结合上皮。牙龈的固有层为各种方向交织的结缔组织纤维束，其中最主要的成分是胶原纤维，它占全部结缔组织56%。牙龈中为数最多的细胞为成纤维细胞，肥大细胞也常在牙龈中出现，此外还有淋巴细胞、浆细胞和巨噬细胞。 本公司生产的人牙龈成纤维细胞永生化采用胰蛋白酶和胶原酶混合消化及转染SV40制备而来，细胞总量约为5×105个/瓶，细胞经Vimentin免疫荧光鉴定，细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为例； 1．细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗瓶底1-2次后加入1ml胰酶，细胞变圆脱落后，加入2ml完全培养基终止消化，可使用血球计数板计数。 2．1000RPM离心5分钟去掉上清。用血清重悬浮，加DMSO至最终浓度为10%。加入DMSO后迅速混匀，按每1ml的数量分配到冻存管中，注意冻存管做好标识。明舟生物按每个冻存管细胞数目大于1X106个细胞冻存。3．将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，至少2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。

将含有1mL细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。2. 加2ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。3. 按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。4. 将细胞悬液按1：2到1：5的比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。