细胞培养的核心之一是无菌操作,那么,菌从何而来?从人、物品以及环境中来。使用一次性、已灭菌的实验工具,能有效降低污染引入的风险,但总有一些工具、总有一些环节是需要反复使用的。而这就需要进行清洁和灭菌。
Part1
选择灭菌方法的基本原则 :
常见的2种操作是高压灭菌和过滤除菌,主要讲一下这两者的区别和注意事项.
灭菌方法的选择主要基于物品在高温下的稳定性,可抗高温的物品例如玻璃、金属、耐热塑料(PTFE)可采用干热灭菌;
热稳定的液体可以采用湿热灭菌,也就是高压蒸气灭菌;热敏感的塑材可以用乙醇或射线灭菌;热不稳定的液体可以采用过滤除菌。
Part2
高压灭菌
常见的高压灭菌方法是,使用灭菌锅加热水提高温度和压力来完成,其实验条件是将实验工具所处的环境加热至121°并维持至少20分钟。
由于水蒸气会渗透至整个空间,灭菌结束后需要有一个干燥的过程,高压蒸汽灭菌适用于热稳定的液体,例如水、盐溶液、或一些成份对热稳定的培养基;例如LB,同时,这种方法也适用于耐热的塑料,不少离心管、移液器、吸头、吸头盒。都是可以通过高压来灭菌的。
使用高压灭菌需要注意2点:1 将含有液体的玻璃器皿进行灭菌,如果其使用塑料盖密封,应在灭菌前拧松盖子,以防灭菌过程发生爆炸;2 如果实验工具需要后续用于无菌操作实验,建议灭菌锅所用的水使用无菌的超纯水,因为灭菌过后,锅内有可能存在凝结水,而后者可能会存在污染带入的风险。
Part3过滤除菌
对于不耐热的液体,可以使用孔径为0.1-0.2um的微孔过滤器除菌,过滤的方法分为正压过滤和负压过滤,区别在于正压过滤大多通过外力推压针筒,使目标液体通过滤器的滤膜后,杂质或污染物留在膜上,液体过滤至新的容器内。负压过滤是通过将容器外接一个泵,利用泵把容器内的空气抽走,实现一个负压的状态,而液体则从容器上方往下透过滤膜流入容器内。