方法一
1. 将培养24小时左右的枯草芽孢杆菌或其他芽孢杆菌,作涂片、干燥、固定。
2. 滴加3~5滴孔雀绿染液于已固定的涂片上。
3. 用木夹夹住载玻片在火焰上加热,使染液冒蒸汽但勿沸腾,切忌使染液蒸干,必要时可添加少许染液。加热时间从染液冒蒸汽时开始计算约4~5分钟。这一步也可不加热,改用饱和的孔雀绿水溶液(约7.6%)染10分钟。
4. 倾去染液,待玻片冷却后水洗至孔雀绿不再褪色为止。
5. 用番红水溶液复染1分钟,水洗。
6. 待干燥后,置油镜观察,芽孢呈绿色,菌体呈红色。
方法二
1. 取二支洁净的小试管,分别加入0.2 ml 无菌水,再往一管中加入1~2接种环的蜡状芽孢杆菌的菌苔,另一管中加入1~2接种环的生孢梭菌的菌苔,两管各自充分混合成浓厚的菌悬液。
2. 在菌悬液中分别加入0.2 ml 苯酚品红溶液,充分混合后,于沸水浴中加热3~5分钟。
3. 用接种环分别取上述混合液2~3环于两片载玻片上,涂薄,风干后,将载玻片稍倾斜于烧杯上,用95%乙醇冲洗至无红色液流出。
4. 再用自来水冲洗,滤纸吸干。
5. 取1~2接种环黑色素溶液于涂片处,立即展开涂薄,自然干燥后,油镜观察,在淡紫灰色背景的衬托下,菌体为白色,菌体内的芽孢为红色。